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使用ELISA试剂盒时必定要注意相关的事项
发布时间:2020-01-10   点击次数:247次
   我们知道,可以用作ELISA测定的标本很广泛,包括了体液、分泌物和排泄物等,均可作标本以测定其间某种抗体或抗原成份。这些标本搜集的时间、方法和保存都有必定的要求。今天上海通蔚生物为您
  说明:ELISA操作严格要求定当做出好实验。
  按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA顶用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗刷的,应为新鲜的和高质量的。ELISA试剂盒自配的缓冲液使用pH计测量较正。从冰箱中取出的实验用试剂应待温度与室温平衡后运用。试剂盒中本次实验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
  为确保试验的成功,使用ELISA试剂盒时必定要注意相关的事项。
  1, 确认本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目。
  2, 将倍比稀释的规范品各0.1ml顺次参加一排7孔中,1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔参加。
  3, 酶标板加上盖,37℃反响90分钟。
  4, 反响后用自动洗板机吸去酶标板内的液体;或甩去酶标板内液体,再对着吸水纸拍几下。洗刷2次。
  5,将准备好的生物素抗体工作液按每孔0.1ml顺次参加。37℃反响60分钟。
  6, 0.01M TBS或0.01M PBS洗刷3次,每次浸泡1分钟左右。
  7,将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml顺次参加。37℃反响30分钟。
  8, 0.01M TBS或0.01M PBS洗刷5次,ELISA试剂盒每次浸泡1-2分钟左右。
  9, 按每孔0.1ml顺次参加TMB显色工作液,37℃避光反响,反响过程中,要常常的调查,当肉眼可见规范品的前3-4孔有显着的梯度蓝色,后3-4孔不同不显着时,即可参加TMB停止液0.1ml/孔。(显色反响长不要超越30分钟)。
  10,用酶标仪在450nm测定O.D.值。
  11,根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也能够使用各种应用软件来核算。应记住由于样品稀释了N倍,其实际浓度应该×N。

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