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常见ELISA试剂盒实验技术要点,不看就没了!
发布时间:2020-10-26   点击次数:101次
  常见ELISA试剂盒实验技术要点,不看就没了!
  对解析出其实验技术要点,下面一起来看看吧。
  1. 准备好所有实验额外所需物品,如试管、吸头、移液器、离心机等;
  2. 根据检测标本数量确定所需试剂的量;
  3. 按说明书将所用试剂平衡至室温,配制所需试剂;
  4. 标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备,尽量分装做备份。短期内无法实验者,注意低温保存。
  实验中为了确定信号和背景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗体(0.25-2μg/ml)在预实验中进行彼此相抗的滴定。同时,应包括在适当范围内的标准品的系列稀释。按试剂说明书常规提供的范围进行操作。
  标准品的配制:对于每种细胞因子应仔细阅读说明书,注意每批的细节。在使用细胞因子前,瞬时离心试剂瓶,尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节,将冻干的细胞因子复溶。
  一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml 到15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。
  为了优化灵敏度,建议过夜孵育标准品和标本。若使用过氧化物酶作为显色系统,应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠,叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。当测定混合液体中的抗原时,如血清,建议在标本稀释液中加不相干的Ig。
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