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贝伐珠单抗(Avastin)试剂盒相关资料
发布时间:2020-07-09   点击次数:185次

1 使用目的:

本试剂盒用于尿样贝伐珠单抗(Avastin)残留的定量检测

2 实验原理

本试剂盒采用竞争ELISA方法,在微孔板包被有贝伐珠单抗(Avastin)偶联抗原,加入贝伐珠单抗(Avastin)标准品或样品,游离贝伐珠单抗(Avastin)与微孔条上预包被的贝伐珠单抗(Avastin)偶联抗原互相竞争抗贝伐珠单抗(Avastin)抗体酶标记物,用TMB底物显色,加入终止液后颜色由蓝色变为黄色,用酶标仪在450nm波长下进行检测,吸光值与样品中贝伐珠单抗(Avastin)含量成反比,通过标准曲线计算样品中贝伐珠单抗(Avastin)的含量。  

3 试剂盒组成

3.1 预包被的贝伐珠单抗(Avastin)偶联抗原的可拆酶标板:1块(12孔×8条)。
3.2贝伐珠单抗(Avastin)标准品:6瓶(1ml/瓶),含量分别是: 0 ppb,0.1 ppb,0.3 ppb,0.9 ppb,2.7 ppb,8.1 ppb
3.3抗贝伐珠单抗(Avastin)抗体酶结合物:1瓶(6ml)。
3.4显色液A:1瓶(6ml)。
3.5显色液B:1瓶(6ml)。
3.6终止液:1瓶(6ml),2M硫酸。
3.7样本稀释液:1瓶(10×,  6ml),用于样品稀释用。
3.8浓缩洗涤液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。
3.9说明书一份。

 

4 需要而未提供的材料
4.1 设备
4.1.1波长450nm酶标仪。
4.1.2粉碎机。
4.1.3量筒。
4.1.4振荡器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman No 1或相当的滤纸。
4.1.7微量移液器。
4.2 试剂
4.2.1去离子水或蒸馏水。
4.2.2 甲醇。
5 贮存
5.1 试剂盒贮存于2~8,切勿冷冻
5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存
6 注意事项
6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
6.2 不要使用过期试剂盒。
6.3 试剂盒使用前,将试剂恢复至室温(25±2),建议至少回温2小时。
6.4 标准品中含有贝伐珠单抗(Avastin),使用时应特别注意,操作时应带手套。
6.5 终止液中含有硫酸,使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。
6.6 不同标准品、样品所用吸头不能混用,否则会影响试验结果。
6.7 不同批号试剂盒中的试剂不得混用;不同标准品、样品所用吸头不得混用,否则会影响实验结果。
6.8 稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液,否则会影响实验结果
6.9 混合试剂时应避免起泡。
7 工作液准备
7.1 贝伐珠单抗(Avastin)标准品溶液:0ppb,0.1ppb,0.3 ppb,0.9ppb,2.7 ppb,8.1ppb
7.2 浓缩洗涤液:用蒸馏水按1:20(1+19)稀释备用

7.3 样本稀释液:用蒸馏水按1:10(1+9)稀释备用
7.3 显色剂:已备用,避免光线直照
7.4 反应终止液:已备用
8 样品处理程序(样品在提取过程中,要严格按说明书操作,提取过程中应准确稀释,否则会出现结果不准确,样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存)
8.1取10g粉碎的样品,加 20ml 70%甲醇溶液
8.2强力振荡3分钟
8.3用Whatman No 1滤纸过滤
8.425µl处理后的样品,加入25µl样本稀释液于反应孔中(样本稀释倍数为2)
9 酶免分析步骤
9.1 实验须知
9.1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温(25±2),时间约2小时。回温至室温(25±2)后再取出微孔条,多余的微孔条重新密封立即于2~8干燥保存
注:一定保证回温充分,否则影响检测的精确度和准确度。
9.1.2 使用后请立即将试剂放回2~8保存
9.1.3 请不要改变分析程序
9.1.4 请使用精确的微量移液器
9.1.5 操作一旦开始,请不要中断任何程序
9.1.6 ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序,请严格按照要求操作
9.1.7 为避免交叉污染,每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样
9.1.8 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面
9.2 分析步骤
9.2.1 预先进行编号,标记B0、标准品和样品的位置,推荐进行双孔检测
9.2.2 取所需数量的微孔(微孔条可拆),将多余板条重新密封并立即放回2~8保存
9.2.3 样品稀释液(10×)、浓缩洗涤液(20×)稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释)
9.2.4 在B0孔中加入50µl  0.0ppb标准品溶液
9.2.5 在各标准孔中加入50μl的标准品溶液
9.2.6 在各样品孔中加入50µl样品溶液
9.2.7 在所有孔中加入50µl的抗贝伐珠单抗(Avastin)抗体酶结合物
9.2.8 轻轻晃动反应板几秒钟。
9.3 37℃温浴30min (温浴过程中不时轻拍反应板,可以减少双孔误差)
9.3.1 甩掉孔中液体,用洗液洗涤微孔板5次,最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。
9.4 反应
9.4.1 洗涤程序完成后,立即用微量移液器在每个微孔中先加入50µl显色液A,再加 50µl显色液B;轻微晃动反应板使之彻底混匀
9.4.2 37℃温浴10min
9.4.3 每孔中加入50µl终止液,混匀
9.4.4 在450nm下检测吸光度,结果在5min内读取。
10 结果计算
10.1定量分析
10.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值(B)除以di yi个标准(0标准)的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0ppb标准溶液的平均吸光度值
10.1.2以贝伐珠单抗(Avastin)浓度的对数值为X轴,百分吸光度值为Y轴,绘制标准曲线图。根据样品百分吸光度值,可从曲线上得到对应点的横坐标,即为贝伐珠单抗(Avastin)浓度的对数值,求得反对数即为测定液中贝伐珠单抗(Avastin)浓度C(ppb
10.1.3由于样品经过了预先稀释,因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。
10.2 半定量测定
10.1.1目测半定量测定:首先选择一个适当的标准液与样品同运行,根据样品与标准品吸光度值的高低比较,判断样品浓度值是小于还是大于标准值。
10.1.2仪器半定量测定:首先选择一个适当的标准液与样品同运行,根据样品与标准品颜色深浅比较,判断样品浓度值是小于还是大于标准值。

 

11 特异性
物质 交叉反应
贝伐珠单抗(Avastin)   100%

12 试剂盒参数
本试剂盒检测下限为0.05ppb
B0吸光度最jia值应大于1.0
试剂盒吸光度板内误差小于8%,板间误差小于15%。
用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80%。
13
试剂盒提供的标准曲线范围为0.1ppb~8.1ppb

14 分析限制
本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLC或GC/MS加以确证。

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