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山羊布鲁氏菌病间接法操作
发布时间:2020-05-19   点击次数:166次

本试剂盒仅供研究使用。

使用目的

本试剂盒用于测定山羊血清、血浆及相关液体样本中布鲁氏菌病(Brucellosis)的含量。

实验原理

本试剂盒应用间接法测定标本中山羊布鲁氏菌病(Brucellosis)水平。用纯化的山羊布

鲁氏菌病(Brucellosis)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入已

知浓度的布鲁氏菌病(Brucellosis)标准品和未知浓度的布鲁氏菌病(Brucellosis)待检样品,

温育后,加入生物素标记的抗 IgG 抗体,再与链霉亲和素-HRP 结合,形成免疫复合物,经

过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转

化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的布鲁氏菌病(Brucellosis)呈正相关。用酶标仪在

450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中山羊布鲁氏菌病(Brucellosis

浓度。

试剂盒组成

1 30 倍浓缩洗涤液

20ml×1

标准品 S1160pg/ml

0.5ml×1

2 链霉亲和素-HRP

6ml×1

标准品 S280pg/ml

0.5ml×1

3 酶标包被板

12 孔×8

标准品 S340pg/ml

0.5ml×1

4 生物素标记的抗-IgG 抗体

6ml×1

标准品 S420pg/ml

0.5ml×1

5 显色剂 A

6ml×1

8

标准品 S510pg/ml

0.5ml×1

6 显色剂 B

6ml×1/

9

说明书 1

7 终止液 6ml×1

10

封板膜

2

标本要求

1.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

操作步骤

1. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复

孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样

品孔。然后在标准品孔中加入标准品 50µl,在样本反应孔中加入 50 微升样本,盖上封

板膜,轻轻振荡混匀,37℃温育 45 分钟。

3. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此

重复 4 次,拍干。

5. 加生物素标记的抗-IgG 抗体:每孔加入生物素标记的抗-IgG 抗体 50µl37℃温育 30

6. 洗涤:操作同 42

7. 加链霉亲和素-HRP:每孔加入 50µl 的链酶亲和素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育 30

分钟。

8. 洗涤:操作同 4

9. 显色:每孔先加入显色剂 A 50µl,再加入显色剂 B 50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

10 分钟.

10. 终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止

液后 15 分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的

OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标

准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值待入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,

即为样品的实际浓度。

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未

用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间醉好

控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4. 如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔地一孔的 OD 值),请先将样本

稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数(×5×n)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.本试剂不同批号组分不得混用。显色剂 B 请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

线性范围6.0pg/ml-160pg/ml

规格96 人份/

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6 个月

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