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ELISA试剂盒中显色剂A,B顺序可以颠倒么?
发布时间:2019-09-04   点击次数:807次

关于显色AB加入的顺序本人还是应该有比较大的关系的!那么显色液中A是过氧化氢 显色液是TMB 一般都是这两种,那么应该怎么去理解呢说明书说先加A再加B ,其实得根据HRP跟TMB跟H2O2的反应:HRP+H2O2+DH2(色原底物其实就是TMB)==2H20+蓝色阳离子根 +终止液(硫酸)==黄色联苯坤
HRP催化H202产生氧,然后与TMB反应,所以这里如果A先加进去跟HRP充分反应的话然后再加入TMB让氧离子跟TMB充分反应,可能显色的结果会好一点!
由于TMB这种色原底物反应后如果终止液中混有还原剂的话,可以产生逆反应导致蓝色褪色!但是这种情况应该不会出现吧!
还有洗板机的问题,如果觉得洗的不干净,用纯水冲一遍!冲的话也是直接往板里倒水!根本就不用考虑什么交叉问题!因为如果隔壁这个阳性标本的血清跑到隔壁去没经过孵育就可以结合的话,那我刚开始还要孵育干嘛,直接加完样洗掉就可以啦! 

后总结建议还是按说明说上的来操作,确保结果。

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